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使用方法：
收到細胞人轉基因細胞現(xiàn)貨供應后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱： 人轉基因細胞現(xiàn)貨供應
簡稱：RKO-E6

種屬：人

來源：

培養(yǎng)基：

狀態(tài)：

產(chǎn)品規(guī)格：

單位：

貨號：AE0142

基本特性：
（ 1 ）組織來源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每凍存管細胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細菌、酵母和真菌。

操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

9,16-Dioxo-10,12,14-octadecatrienoic acid  217810-46-3  中文名：  分子式：C18H26O4  度：%  關鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠孕(mouse PROG)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  

9,10-Bis(3,5-dihydroxyphenyl)anthracene  153715-08-3  中文名：9,10-雙(3,5-二羥苯基)蒽  分子式：C26H18O4  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

8-Phenyloctanol  10472-97-6  中文名：8-苯基辛醇  分子式：C14H22O  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

8-Phenyloctanoic acid  26547-51-3  中文名：8-苯基辛酸  分子式：C14H20O2  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠顆粒酶B(Gzms-B)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

8-Hydroxyodoroside A  176519-75-8  中文名：  分子式：C30H46O8  度：96.0%  關鍵詞：  夾竹桃; 強心苷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝
小鼠骨膠原交聯(lián)elisa試劑盒   小鼠骨膠原交聯(lián)試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠骨膠原交聯(lián)試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠骨膠原交聯(lián)試劑盒、小鼠骨膠原交聯(lián)eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Cefquinome  中文名：頭孢喹咪  分子式：C23H24N6O5S2  度：98.0%

小鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Deoxycholic acid  中文名：去氧膽酸  分子式：C24H40O4  度：98.5%

小鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Coumarin 7  中文名：香豆素 7  分子式：C20H19N3O2 

小鼠骨堿性0酸酶（BALP）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Deoxycholic acid  中文名：去氧膽酸  分子式：C24H40O4 

小鼠骨鈣素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Deoxycholic acid  83-44-3  中文名：去氧膽酸  分子式：C24H40O4  度：98.5%  關鍵詞：  膽烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫
Dregeoside Aa1  20230-41-5  中文名：  分子式：C49H78O17    兔子基質金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Tigogenin  77-60-1  中文名：劍麻皂素  分子式：C27H44O3    Human thymidine phosphorylase (TP) ELISA Kit 人胸腺嘧啶核苷0酸化酶(TP)ELISA試劑盒

Adynerigenin β-neritrioside  88721-09-9  中文名：  分子式：C42H64O17    HumanAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit 人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Tenacissoside G  191729-43-8  中文名：通關藤苷G  分子式：C42H64O14    Humaneosinophilcationicprotein,ECPELISA試劑盒人嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(ECP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Dehydroadynerigenin β-neritrioside  143212-60-6  中文名：  分子式：C42H62O17    組織PKCι激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
人轉基因細胞現(xiàn)貨供應中文名：枸櫞酸  分子式：C28H38N6O11S    HumanPlatelet-DerivedGrowthFactorAB，PDGF-ABELISAKit人血血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Amlexanox  68302-57-8  中文名：氨來呫諾  分子式：C16H14N2O4    兔子主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHCⅢ/RLAⅢ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Losartan  114798-26-4  中文名：氯沙坦  分子式：C22H23ClN6O    Human cyclin D1 (Cyclin-D1) ELISA Kit 人細胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒

Glyburide  10238-21-8  中文名：格列本脲  分子式：C23H28ClN3O5S    Humanmitoticspindleapparatusaibody,MSAELISAKit 人抗紡錘體抗體(MSA)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Rosiglitazone  122320-73-4  中文名：羅格列酮  分子式：C18H19N3O3S    Humancytokeratin17,CK-17ELISA試劑盒人細胞角蛋白17(CK17)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

實驗操作：
1、培養(yǎng)瓶預包被。試驗前一天預包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無菌條件下迅速取出大鼠主動脈。
3、材料預處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無菌鑷子剝去外膜面的殘留組織。PBS洗滌凈。
4、除去內皮細胞：將縱向剪開， 內膜面向上，無菌鑷子沿中軸方向反復刮動內膜層4-5遍，去掉內皮細胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內膜的，繼續(xù)刮動分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復消化3次。
8、收集重懸細胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計數(shù)細胞。
9、培養(yǎng)細胞密度：調整細胞密度以5 × 105個/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。